Лонг фото: Long: скачать картинки, стоковые фото Long в хорошем качестве

Содержание

Long Thuan Resort 3* (Вьетнам/Провинция Ниньтхуан/Фанранг-Тхапчам/Нинх Чу). Отзывы отеля. Рейтинг отелей и гостиниц мира

Оксана оценила сервисы

5.0
Инфраструктура отеля

5.0
Безопасность в отеле

5.0
Благоустройство территории

5.0
Рестораны и бары


Удобная парковка

5. 0
Качество сервисов и обслуживания


Анимация

5.0
Вежливый и внимательный персонал

5.0
Работа ресепшен

5.0
Скорость и качество интернет соединения(WiFi)

4. 6
Номера

5.0
Звукоизоляция в номере

4.0
Качество мебели, сантехники

5.0
Кондиционирование номеров

4.5
Уборка номеров


Пляж


Инфраструктура пляжа


Комфортное число отдыхающих


Удобный вход в море


Чистота на пляже

5. 0
Подходит для отдыха


Деловая поездка


Если нужно только переночевать

5.0
Парой


С друзьями


Семейный с детьми


Спокойный


Тусовочный


Сервисы для детей


Детская анимация


Инфраструктура для детей


Питание для детей

4. 0
Удобство расположения

3.0
Где развлечься — ночные клубы, кино, т.д.

4.0
Кафе, рестораны, магазины

4.0
По отношению к достопримечательностям

5.0
По отношению к пляжу

Китайские автомобили — Страница не найдена


Китайские автомобили



  • Форумы
  • Выбор
    • Отзывы владельцев
    • Краш-тесты
    • Фото автомобилей
    • Видеообзоры, тест-драйвы
    • Статистика продаж
    • Новости
  • Обслуживание
    • Магазины запчастей
    • Сервисы
    • Документация
    • Wiki-справочник
  • Каталог
    • Все
    • Легковые
    • Кроссоверы
    • Внедорожники
    • Автобусы
    • Грузовики
    • Электромобили
  • Марки
    • Все



    • Haval
    • Chery
    • Geely
    • Lifan
    • Great Wall
    • Dongfeng
    • Changan
    • Brilliance
    • FAW
    • Zotye
    • Другие




  • Chery

    • Tiggo 8
    • Tiggo 8 Pro
    • Tiggo 7 Pro
    • Tiggo 5
    • Tiggo 4
    • Tiggo 3
    • Tiggo 2
    • CheryExeed TXL
    • Tiggo FL
    • Tiggo
    • Другие

  • Geely

    • Geely Atlas
    • Geely Coolray
    • Emgrand X7
    • GS
    • Tugella
    • Emgrand EC7
    • Другие

  • Haval

    • Haval F7
    • Haval F7x
    • Haval h3
    • Haval H6
    • Haval H9
    • Haval H5
    • Другие

  • Lifan

    • X70
    • X60
    • X50
    • Murman
    • Myway
    • Solano II
    • Другие

  • Changan

    • Changan CS35
    • Changan CS55
    • Changan CS75
    • Другие

  • Dongfeng

    • DongFeng AX7
    • DongFeng 580
    • DongFeng h40 Cross
    • DongFeng S30
    • DFSK V21/V22
    • DFSK V25
    • Другие
    • Грузовики Dongfeng

  • FAW

    • Besturn X80
    • Besturn X40
    • Besturn B50
    • D60
    • Другие
    • Грузовики FAW

  • Great Wall

    • Pao
    • Wingle 7
    • Hover H5
    • Hover h4 New
    • Hover h4
    • Hover
    • Wingle 5
    • Safe
    • Deer
    • Другие


  • GAC

    • GAC GS8
    • GAC GS5
    • GAC GN8
    • Другие


  • JAC

    • Jac S3
    • Jac S5
    • Jac S7
    • Jac T6
    • Другие




  • Другие


    • Автобусы ►

      • DongFeng
      • Golden Dragon
      • Higer
      • King Long
      • Mudan
      • SHEN LONG
      • Shuchi
      • Yutong

    • Грузовики ►

      • BAW
      • Beifang
      • CAMC
      • DongFeng
      • FAW
      • Foton
      • JAC
      • Jinbei
      • JMC
      • Howo
      • Shaanxi
      • Yuejin
    • BAIC
    • Brilliance
    • BYD
    • Changfeng
    • Foton

    • Hafei
    • Haima
    • Hawtai
    • JMC
    • Landwind
    • MG
    • Qoros
    • Roewe
    • Zotye
    • ZX Auto
    • Другие. ..

  • Главная
  • Форумы
  • Отзывы владельцев
  • Краш-тесты
  • Фото, Видео
  • Дилеры
  • Документация, Wiki
  • Запчасти, сервис
  • Каталог автомобилей
  • Легковые
  • Кроссоверы
  • Внедорожники
  • Автобусы, грузовики
  • Электромобили
  • Статистика продаж
  • Иностранные бренды


У нас нет такой страницы :((

E-mail: [email protected]
Реклама на сайте
О нас

Тревор Лонг (Trevor Long), Актер: фото, биография, фильмография, новости

Американский актер театра и кино, известный по сериалам «Черный список» и «Слепое пятно».

Тревор Лонг (Trevor Long) провел свое детство и юность в городах Питтсбург (штат Пенсильвания) и Джеймстаун (штат Род-Айленд). Окончил университет Брауна и университет Рутгерса, получив диплом магистра наук. С 1998 года он является членом труппы театра LAByrinth Theater Company, художественными руководителями которого выступал Филип Сеймур Хоффман. Тревор Лонг часто гастролирует в составе театральной труппы по США, играл в театрах Нью-Йорка и Лос-Анджелеса.

Актерская карьераТревора Лонга началась в 1995 году с эпизода в картине «Дон Жуан де Марко». Затем было еще несколько незначительных ролей. В 2010 году актер снимается в фильме «Джек отправляется в плавание», режиссером которого был Филип Сеймур Хоффман. В 2013 году Тревор Лонг появился в американском драматическом детективном сериале канала NBC «Черный список», где также снялись Меган Бун и Диего Клаттенхофф.

В 2015 году состоялась премьера первого сезона сериала «Слепое пятно» с участием актера. В центре сюжета находится потерявшая память девушка, сумевшая выбраться из брезентового мешка в самом центе Нью-Йорк Сити на Таймс Сквер. Не имея ни малейшего представления о том, кто она такая, девушка не знает, что обозначают многочисленные загадочные татуировки, покрывающие все ее тело. Когда выясняется, что татуировки являются чем-то вроде дорожной карты, к делу подключается ФБР. В сериале также снялись: Джейми Александер, Салливан Степлтон, Одри Эспарза, Роб Браун. В настоящее время Тревор Лонг вместе со своим братом работает над их режиссерским дебютом в картине под названием «Семя».

Тревор Лонг/Trevor Long. Фильмография

 

Seeds (2016)

Слепое пятно (сериал, 2015 – …)

Чёрный список (сериал, 2013 – …)

Низкое зимнее солнце (сериал, 2013)

Развод в большом городе (2012)

Ограбление казино (2012)

Джек отправляется в плаванье (2010)

The Roofer (2009)

Concerto (2009)

Зверская резня (2007)

The Karaoke King (2007)

Fat Cats (2005)

Pit (2001)

Дон Жуан де Марко (1995)

Ниа Лонг (Nia Long) 10 фото | ThePlace

Фотогалерея Ниа Лонг содержит 10 фото высокого качества.
Дата последнего обновления в галерее 23 янв. 2014

Самые популярные фотографии Nia Long (на основе голосования посетителей нашего сайта)

Ниа Лонг / фотогалерея


Если у вас есть интересные фото Ниа Лонг (Nia Long),
Вы можете загрузить их на нашем форуме. Качественные фото будут добавлены в фотогалерею.









1200×1803







4



1280×1881







3



1280×1990







4



850×1277







14



1839×2100







11



800×1114







6



999×1450







5



1312×2000







4



1200×1500







6



2000×3008


— проголосуй за фото
Ниа Лонг (Nia Long)
(фото-рейтинг)

BMW F18 Long — характеристика — фото

Мировая премьера BMW F18 Long version с удлиненная колесная база разработана и построена исключительно для китайского рынка.  Этот действительно эксклюзивный седан, благодаря своему спортивному, но элегантному дизайну поистине впечатляет со всех сторон, особенно впечатлил пространством в задней части салона.

Дизайн BMW F18

БМВ Ф18 с удлиненной колесной базой имеет спортивный, элегантный и индивидуальный дизайн. Выразительная передняя часть, элегантный силуэт и растянутый кузов к задней части поистине дают автомобилю безошибочный взгляд автомобиля класса люкс.

Версия Long на 14 см длиннее от стандартного седана F10 5 серии. Длинные боковые окна придают особенно стройный и динамичный внешний вид. Характерные дневные огни со светодиодными кольцами в сочетании с дополнительными ксеноновыми фарами, а также с задней оптикой способствуют особому характерному взгляду БМВ.

Салон BMW F18

Интерьер седана – это четкая ориентация на роскошь и комфорт в задней части автомобиля. Салон Ф18 сочетает в себе высокотехнологичные приборы, роскошную атмосферу, много места для пассажиров на заднем сидении, что есть эксклюзивным для этого класса автомобилей.

Люксовый седан поставляется с высоко-комфортными задними сидениями разработанными специально для этой модели. Комфорт в автомобиле обеспечивается 4-зонным кондиционером, холодильником, электрически-регулируемыми жалюзями на задних боковых окнах и складным встроенным столиком в спинке переднего пассажирского сидения, и это является уникальной особенностью в беспрецедентной конкуренции.

Технические характеристики BMW F18 Long

Двигатели и модельный ряд

Мотор Объем Мощность, л.с. Крутящий момент, Нм Средний расход, л/100 км
520Li N20B20
N52B25
1997
2497
184
190
270
230
6,9
523Li N52B25 2494 204 250
525Li N20B20 1997 218 310 7,0
528Li N52B30
N20B20
2996
1997
258
245
310
350
8,4
7,2
530Li N53B30 2996 258 310 7,6
535Li N55B30 2979 306 400 8,5
530Le N20 1997 218 310 2,0

Коробка передач BMW F18

Все версии удлиненного седана F18 5 Series в стандартной комплектации поставляются с 8-ступенчатой автоматической коробкой передач, а усилитель руля EPS делает дополнительный вклад в эффективность автомобиля. Основными моментами BMW EfficientDynamics на борту автомобиля можно назвать регенерацию энергии торможения, активное управление воздушной заслонки и другие функции для получения топливной экономичности.

Размеры BMW F18 Long Version

габариты в мм/объем в литрах до рестайлинга/LCI
Длина 5039/5055
Ширина 1860
Высота 1492/1491
Колесная база 3108
Колея:
передняя
задняя
1600
1627/1626
Клиренс 149
Объем багажника 520

Видео BMW F18 Long 5 Series

На Android Instagram продолжал правильно обрезать изображения, поэтому вы не могли их опубликовать. Тем не менее, изображения по-прежнему отображаются в вашей ленте очень длинными, поэтому вы можете видеть, что публикуют другие.

Это почти наверняка сбой, а не новая функция, поэтому вряд ли она надолго задержится. На данный момент влиятельные лица и аккаунты мемов быстро подхватили его как новый способ привлечь внимание людей к приложению.

Их привлечение внимания, возможно, зашло слишком далеко: в пятницу несколько человек заявили, что сверхдлинные посты застревали в верхней части их ленты каждый раз, когда они проверяли Instagram. Это привело к появлению жалоб в комментариях … и некоторых людей перестали читать, чтобы их сообщения исчезли.

Обновление 7 мая, 14:45 по восточному времени: Instagram, похоже, предотвратил публикацию длинных изображений. Мы обновили историю, чтобы отразить исправление.

Обновление 7 мая, 15:40 по восточноевропейскому времени: В эту историю добавлен комментарий от Facebook.

Обновление , 8 мая, 11:50 по восточноевропейскому времени: В эту историю добавлено упоминание о том, что длинные сообщения застревают в верхней части каналов пользователей. Мы удалили запись нашего креативного директора, встроенную в эту историю … потому что она застревала в верхней части ленты его подписчиков.

Оптимизированная фотостимуляция галородопсина для длительного нейронального ингибирования | BMC Biology

Синий свет ускоряет восстановление e

Np HR3.0-опосредованные токи от инактивации в зависимости от продолжительности и мощности

Чтобы изучить потенциальные преимущества альтернативных парадигм фотостимуляции e Np HR3.0, мы экспрессировали слитый белок e Np HR3.0-EYFP. в глутаматергических нейронах гиппокампа мышей с использованием трансгенного подхода ( Emx1 IREScre : eNpHR3.0-EYFP LSL мышей) [27]. Записи с фиксацией напряжения для всех клеток идентифицированных пирамидных клеток EYFP + CA1 выполняли в постоянном присутствии антагонистов потенциал-управляемых каналов Na + (0.5 мкМ ТТХ) и ионотропных рецепторов глутамата и ГАМК (10 мкМ DNQX, 50 мкМ APV, 10 мкМ бикукуллина) для устранения повторяющегося возбуждения и минимизации синаптического шума. В соответствии с опубликованными данными, фотостимуляция с использованием желтого света (594 нм, 5 мВт на конце оптического волокна) вызывала внешние токи, которые быстро спадали до 34,2 ± 3,0% от начальной пиковой амплитуды в течение 10 с непрерывного воздействия света ( I пик 62,0 ± 5,8 пА, n = 15 клеток; рис. 1а, б). Мы исследовали восстановление после инактивации с помощью дополнительного тестового импульса 594 нм при переменных временных задержках (Δ t ) и обнаружили, что оно было медленным в контрольных условиях (постоянная времени моноэкспоненциальной подгонки, 54.1 ± 2,6 с, n = 7 ячеек; Рис. 1в). Восстановление после инактивации было значительно усилено коротким импульсом синего света (488 нм, 500 мс, 5 мВт) в зависимости от Δ t [взаимодействие (управление / спасение × Δ t ): F = 17,8 , df = 4, P = 2,9 × 10 -9 , n = 7/8 клеток (контроль / спасение), смешанная модель ANOVA; Δ t = 15 с: t (13) = — 12,3, P = 1,5 × 10 −8 , Δ t = 30 с: t (8. 2) = 16,1, P = 1,6 × 10 −7 , Δ t = 45 с: t (13) = — 12,3, P = 1,6 × 10 −8 , Δ t = 60 с: t (13) = 12,1, P = 1,9 × 10 −8 , Δ t = 75 с: t (13) = — 5,1, P = 2,1 × 10 −4 , двухвыборка т испытаний; Рис. 1б, в]. На уровне популяции постоянная времени восстановления существенно не коррелировала со степенью инактивации, вызванной начальной фотостимуляцией на длине волны 594 нм (коэффициент ранговой корреляции Спирмена = — 0.38, P = 0,16, n = 15 ячеек; Рис. 1г). Затем мы рассмотрели требования к времени и мощности для спасательной стимуляции синим светом. В первой серии экспериментов мы систематически меняли длительность светового импульса 488 нм, сохраняя при этом подаваемую мощность постоянной (5 мВт). Мы обнаружили, что восстановление после инактивации монотонно увеличивалось с увеличением длительности импульса синего света ( F = 575, df = 3,2, P = 3,4 × 10 −28 , n = 11 клеток, одна- ANOVA с повторными измерениями, поправка Хюйна-Фельдта; рис. 1д, е). Во второй серии экспериментов мы систематически меняли мощность светового импульса 488 нм с постоянной длительностью 1 с. Восстановление после инактивации в значительной степени зависело от мощности синего света ( F = 529, df = 7, P = 2,3 × 10 −62 , n = 12 ячеек, однофакторный дисперсионный анализ с повторными измерениями; Рис. 1ж, з), но насыщается на уровне, близком к 3 мВт.

Рис. 1

Синий свет ускоряет восстановление опосредованных e Np HR3.0 токов от инактивации в зависимости от продолжительности и мощности. a Образец записи фиксации напряжения, иллюстрирующий, что длительная (10 с) фотостимуляция при 594 нм (5 мВт) вызывает выраженную инактивацию опосредованных e Np HR3.0 токов. Обратите внимание, что восстановление после инактивации происходит медленно (тестовый импульс при Δ t = 15 с). b График образца из другой клетки, демонстрирующий, что синий свет (500 мс, 488 нм, 5 мВт) ускоряет восстановление после инактивации. Также обратите внимание на внешний ток, индуцированный синим светом. c Восстановление e Np HR3.0-опосредованные токи усиливаются синим светом. На вставке, восстановление определяется как отношение амплитуд тока, индуцированного испытанием (при Δ t ), к начальному импульсу, измеренному относительно I в конце (т.е. восстановление = A 2 / A 1 ). Пунктирные линии представляют собой моноэкспоненциальные соответствия данным о населении. Каждую клетку тестировали на все значения Δ t либо без (контроль, n = 7 клеток), либо с (Rescue, n = 8 клеток) промежуточной фотостимуляции при 488 нм (500 мс).В моделях a, и b, , отклики тока на — 10-мВ шаги напряжения, используемые для контроля сопротивления доступа, обрезаны для ясности (#). d Независимо от степени инактивации (1 — I конец / I пик ) постоянные времени восстановления ниже для спасения по сравнению с контрольными испытаниями. Каждый символ представляет одну ячейку. e Восстановление после инактивации зависит от длительности 488-нм спасательного импульса (синие линии).Все следы взяты из одной клетки. f Количественная оценка. г Восстановление после инактивации зависит от мощности 488-нм спасательного импульса при постоянной длительности 1 с. Все следы взяты из одной клетки. ч Количественная оценка. Данные представлены как среднее ± SEM

В совокупности наши данные демонстрируют, что синий свет ускоряет восстановление опосредованных e Np HR3.0 токов от инактивации в зависимости от продолжительности и мощности.

Синий свет ослабляет инактивацию e

Np HR3.0-опосредованные токи во время длительной фотостимуляции в зависимости от средней мощности

Затем мы оценили, можно ли аналогичным образом использовать синий свет для предотвращения инактивации опосредованных e Np HR3.0 токов при совместном применении с фото- стимуляция на 594 нм. С этой целью мы фотостимулировали клетки постоянной мощностью света 594 нм (5 мВт) и систематически варьировали мощность возбуждения 488 нм (рис. 2а, б). Мы количественно оценили этот эффект, определив оставшийся ток в конце фотостимуляции ( I конец ) как долю от пика e Np HR3.0-опосредованный ток (т.е. I поздний / I пик ). Мы обнаружили, что I поздно / I пик сильно зависит от мощности синего света ( F = 226, df = 3,7, P = 3,1 × 10 −15 , n = 6 ячеек, однофакторный дисперсионный анализ с повторными измерениями, поправка Хюня-Фельдта; рис. 2b) с достижением кажущегося насыщения при примерно 3 мВт.

Рис. 2

Совместная стимуляция при 594 нм и 488 нм ослабляет инактивацию e Np HR3.0-опосредованные токи при длительной фотостимуляции в зависимости от средней мощности. a Образец записи фиксации напряжения из одной ячейки, иллюстрирующий токи, опосредованные e Np HR3. 0 в ответ на фотостимуляцию при 594 нм (5 мВт) отдельно (вверху) или в сочетании с 488 нм при различных уровнях мощности (средний и нижний). Указанные уровни мощности относятся к свету с длиной волны 488 нм. b Зависимость инактивации от мощности 488-нм света. c Спасательный эффект 488-нм света на инактивацию e Np HR3.Ток, зависящий от 0, зависит от его средней, а не от пиковой мощности. Вверху: непрерывная стимуляция 488 нм (слева) одинаково эффективна для ослабления инактивации по сравнению с импульсной (1 кГц, 20/80% вкл / выкл) стимуляцией при постоянной средней мощности (справа). Внизу : непрерывная стимуляция 488 нм (слева) более эффективна для ослабления инактивации по сравнению с импульсной (1 кГц, 20/80% вкл / выкл) стимуляцией при постоянной пиковой мощности (справа). d Для количественной оценки I конец , измеренный во время импульсной стимуляции, был нормализован до I конец , полученный для соответствующих испытаний непрерывной стимуляции. Каждый символ представляет одну ячейку. Данные представлены как среднее ± стандартная ошибка среднего. ** P <0,01

Мы дополнительно исследовали возможность минимизировать общую мощность синего света, излучаемого за счет использования высокочастотной («импульсной», 1 кГц) стимуляции с режимом 20/80% (вкл. / Выкл.) цикл с помощью акустооптического перестраиваемого фильтра (см. раздел «Методы»). В первой серии экспериментов мы сравнили эффекты непрерывной и импульсной фотостимуляции при постоянной средней мощности 3 мВт (рис.2c, вверху) или 0,2 мВт за счет компенсирующего увеличения пиковой мощности света 488 нм в испытаниях импульсной стимуляции. На обоих уровнях мощности нормализованные амплитуды I поздних во время импульсной стимуляции существенно не отличались от значений, полученных во время непрерывной стимуляции (0,2 мВт: 100,7 ± 2,1% от контроля, t (4) = -0,63, P = 0,56, n = 5 ячеек, парные t тест; 3 мВт: 102,6 ± 1,4% контроля, t (3) = — 1,98, P = 0. 14, n = 4 ячейки, парный тест t ; Рис. 2г). В независимой серии экспериментов непрерывную и импульсную фотостимуляцию сравнивали при постоянной пиковой мощности света 488 нм либо 3 мВт (рис. 2c, внизу), либо 0,2 мВт, что эффективно снизило среднюю мощность в испытаниях импульсной стимуляции до 20%. В соответствии с приведенными выше данными, импульсная стимуляция при постоянной пиковой мощности была значительно менее эффективной в предотвращении инактивации по сравнению с непрерывным возбуждением, что отражено в более низких значениях I в конце (0.2 мВт: 63,5 ± 4,0% контроля, t (4) = 7,11, P = 2,1 × 10 −3 , n = 5 ячеек, парные t тест; 3 мВт: 66,9 ± 5,7% контроля, t (3) = 7,14, P = 5,7 × 10 −3 , n = 4 ячейки, парные t тест; Рис. 2г).

Исходя из тех же соображений и принимая во внимание, что кинетика дезактивации токов, опосредованных e Np HR3. 0, находится в диапазоне нескольких миллисекунд, мы затем исследовали потенциальное преимущество импульсного [1 кГц, 20/80% (включения / выключения) рабочего цикла] по сравнению с непрерывной фотостимуляцией на длине волны 594 нм на фоне непрерывного возбуждения синим светом постоянной мощности (5 мВт).Мы обнаружили, что I поздние амплитуды существенно не различались между двумя режимами, если средняя мощность света 594 нм поддерживалась постоянной на уровне 3 мВт путем компенсаторного увеличения пиковой мощности в испытаниях импульсной стимуляции (нормализованное I позднее 96,0 ± 1,6%). Напротив, I поздний был значительно снижен до 81,4 ± 1,1%, если пиковая мощность света 594 нм не изменилась (непрерывная / средняя мощность = 3 мВт по сравнению с импульсной / средней мощностью = 3 мВт: P = 0 .21, непрерывная / средняя мощность = 3 мВт по сравнению с импульсной / средней мощностью = 0,6 мВт: P = 7,4 × 10 -4 , апостериорные t тесты с поправкой Бонферрони; F = 46,1, df = 2, P = 2,3 × 10 −6 , n = 7 ячеек, односторонний дисперсионный анализ с повторными измерениями).

Мы дополнительно исследовали, отражает ли эффект синего света присущее свойство e Np HR3.0, выполнив дополнительные эксперименты на ГАМКергических интернейронах, экспрессирующих соматостатин (SOM) ( SOM IREScre : eNpHR3.0-EYFP LSL мышей) [28]. При непрерывной стимуляции на длине волны 594 нм (5 мВт) фототоки, опосредованные e Np HR3.0, затухают в течение нескольких секунд (дополнительный файл 1: Рисунок S1 A ). Напротив, чередование фотостимуляции желтым и синим светом (1 кГц, рабочий цикл 50/50%, каждый 5 мВт) существенно увеличивало I поздний ( t (4) = — 3,54, P = 0,024), а I пик умеренно уменьшился ( t (4) = 5.94, P = 4,0 × 10 −3 ), что привело к значительному увеличению I в конце / I пик ( t (4) = — 29,0, P = 8,4 × 10 −6 , n = 5 ячеек, парных t тестов; Дополнительный файл 1: Рисунок S1 ( A – C ).

В целом, наши данные демонстрируют, что синий свет ослабляет инактивацию опосредованных e Np HR3.0 токов во время длительной фотостимуляции на длине волны 594 нм в зависимости от средней мощности, а не от пиковой мощности.Аналогично, I конец в значительной степени определяется средней, а не максимальной мощностью излучения 594 нм.

Один только синий свет обеспечивает эффективную и стабильную долгосрочную фотостимуляцию e

Np HR3.0

В то время как предыдущие эксперименты обеспечивают стратегию повышения временной стабильности опосредованных e Np HR3.0 токов, наши Исходные данные с использованием спасательных импульсов синего света (рис. 1b) уже показали, что только фотостимуляция при 488 нм способна вызывать токи наружу в e Np HR3.0-EYFP + ячеек. Поэтому мы решили систематически исследовать свойства вызванной синим светом фотостимуляции e Np HR3.0. С этой целью клетки подвергали фотостимуляции при длине волны 594 нм или 488 нм при уровнях мощности от 1 до 5 мВт (рис. 3a). На каждом исследованном уровне мощности значения I пика были значительно выше для желтого света по сравнению со стимуляцией синим светом (1 мВт: t (6) = — 6,62, P = 5,7 × 10 — 4 ; 3 мВт: т (6) = — 7.35, P = 3,2 × 10 −4 ; 5 мВт: t (6) = — 6,57, P = 5,9 × 10 −4 ; n = 7 ячеек; парные т проб; Рис. 3а, в). Однако поразительно, что текущие реакции, вызванные фотостимуляцией синим светом, показали необычайную временную стабильность. Мы количественно оценили этот эффект, определив I конец / I пик (рис. 3d), который, как мы обнаружили, значительно выше для фотостимуляции при 488 нм по сравнению с 594 нм (1 мВт: т. (6) = 11.94, P = 2,1 × 10 −5 ; 3 мВт: t (6) = 19,69, P = 1,1 × 10 −6 ; 5 мВт: t (6) = 30,21, P = 8,7 × 10 −8 ; n = 7 ячеек, парных t тестов; Рис. 3а, г). Кроме того, в то время как отношение I поздно / I пик сильно уменьшалось с увеличением уровней мощности для света 594 нм, эта зависимость была значительно слабее в случае фотостимуляции синим светом (рис.3а, г). В результате такого поведения абсолютные I поздние амплитуды, вызванные на 594 нм по сравнению с 488 нм, расходятся в зависимости от мощности [взаимодействие (594/488 нм × мощность): F = 42,3, df = 1,06, P = 4,6 × 10 −4 , двухфакторный дисперсионный анализ с повторными измерениями, поправка Хюня-Фельдта; Рис. 3b]. Затем мы попытались определить, в какой степени комбинации синего и желтого света при постоянной общей мощности (5 мВт) могут еще больше увеличить I конец .Поразительно, что все протестированные комбинации 488/594 нм, а также 488 нм по отдельности явно превзошли фотостимуляцию с чистым желтым светом, что отражено в более высоких значениях I поздно (594 нм по сравнению со всеми другими группами: P = 5,1). × 10 −3 или ниже, post hoc t испытания с поправкой Бонферрони; F = 71,4, df = 1,3, P = 2,1 × 10 −6 , n = 9 клеток, одна- метод ANOVA с повторными измерениями, поправка Хюйна-Фельдта; рис.3д, е). Самые высокие значения I поздний были обнаружены для комбинаций с долей синего света 40–60%, которые умеренно превышали I поздние значения , вызванные только 488 нм (рис. 3f).

Рис. 3

Только свет с длиной волны 488 нм обеспечивает эффективную и стабильную долгосрочную фотостимуляцию e Np HR3.0. a Образец записей фиксации напряжения с одной клетки, иллюстрирующих зависимость мощности HR-опосредованных токов, вызванных фотостимуляцией при 594 нм (вверху) или 488 нм (внизу), доставленных при 1 мВт (слева), 3 мВт (в центре) или 5 мВт (справа).Обратите внимание, что фототоки, вызванные на длине волны 488 нм, демонстрируют более низкие пиковые амплитуды, но высокую временную стабильность во всем исследованном диапазоне мощности. В конце каждого испытания использовали свет с длиной волны 488 нм (5 мВт) для ускорения восстановления после инактивации (обратите внимание на разницу в кинетике возникновения вызванных токов в зависимости от степени предыдущей инактивации). Токовые характеристики: — Шаги напряжения 10 мВ, используемые для контроля сопротивления доступа, обрезаны для ясности (#). b d Поздние ( I поздние , b ) и пиковые ( I пик , c ) амплитуды тока, а также отношение I поздних к I пик ( d ), нормализованный к соответствующим значениям при 594 нм и 1 мВт ( n = 7 ячеек). e Образец следов от одной клетки, фотостимулированной на длине волны 594 нм и / или 488 нм и постоянной общей мощности света 5 мВт. f Количественная оценка I в конце , измеренная во время режимов фотостимуляции, указана нормированная на I в конце , полученная только путем фотостимуляции при 594 нм (5 мВт). Обратите внимание, что каждая тестируемая комбинация 594 нм плюс 488 нм (при постоянной общей мощности) значительно превосходила фотостимуляцию только на 594 нм (пунктирная линия).Каждый символ представляет одну ячейку. Данные представлены как среднее ± стандартная ошибка среднего. ** P <0,01, *** P <0,001

В совокупности наши данные неожиданно показывают, что фотостимуляция при 488 нм либо отдельно, либо в сочетании со светом 594 нм существенно усиливает неинактивирующий e Np HR3 .0-опосредованные токи и значительно улучшают их временную стабильность.

Зависимость фототоков e

Np HR3.0 от длины волны, измеренная в X.laevis ооцитов

Для дальнейшей количественной оценки зависимости e Np HR3.0 от длины волны и ее обобщения на другие системы экспрессии, мы затем выполнили двухэлектродные записи с фиксацией напряжения от ооцитов X. laevis , экспрессирующих e Np HR3. .0. Сначала мы сравнили инактивацию e Np HR3.0 во время длительного (60 с) освещения на трех разных длинах волн: 590 нм, 532 нм и 473 нм. Мы обнаружили, что свет с длиной волны 590 нм может вызывать самые высокие начальные амплитуды фототока, но также показал самую сильную инактивацию (рис.4a – c) по сравнению со светом 532 нм или 473 нм той же интенсивности (2,6 мВт / мм 2 ; F = 345, df = 2, P = 6,4 × 10 −7 , n = 4 ячейки, односторонний дисперсионный анализ с повторными измерениями, рис. 4c). Затем мы подтвердили, что инактивация e Np HR3.0 зависит от мощности света. Инактивация фототока становилась более заметной с увеличением мощности на 590 нм или 532 нм (590 нм: F = 194, df = 2,05, P = 1,1 × 10 -7 , n = 5 ячеек, один дисперсионный анализ ANOVA с повторными измерениями с поправкой Гринхауса-Гейссера; 532 нм: F = 21.3, df = 1,11, P = 0,007, n = 5 ячеек, односторонний дисперсионный анализ ANOVA с повторными измерениями с поправкой Гринхауса-Гейссера; Рис. 4г). В соответствии с нашими результатами, полученными на мышах, не наблюдалось явной инактивации для света 473 нм при мощности до 6,6 мВт / мм 2 ( F = 3,74, df = 1,92, P = 0,074, n = 5 ячеек, однофакторный дисперсионный анализ ANOVA с повторными измерениями с поправкой Гринхауса-Гейссера; рис. 4d).

Рис. 4

Зависимая от длины волны инактивация и восстановление e Np HR3.0 в ооцитах X. laevis . a Образец фототоковых следов e Np HR3.0 после стимуляции в течение 60 с при 590 нм, 532 нм или 473 нм при постоянной интенсивности (2,6 мВт / мм 2 ). b , c Количественная оценка начального пикового тока ( I пик ), остаточного тока в конце освещения ( I конец ) и отношения I поздно / Я пик . d I поздно / I пик при 60-секундном освещении на 590 нм, 532 нм или 473 нм при различной интенсивности света ( n = 5 ячеек). e Пример кривой фототока e Np HR3.0. Инактивацию вызывали 60-секундным световым импульсом на длине волны 590 нм (2,6 мВт / мм 2 ). Восстановление проверялось импульсами света длительностью 10 мс (590 нм, 2,6 мВт / мм 2 ) через 1, 5, 10, 20, 40, 60, 120 и 300 с после первоначального 60-секундного освещения. f Количественная оценка извлечения e Np HR3.0 ( n = 8 ячеек). г Пиковые следы образца из трех разных ячеек, демонстрирующие, что синий (473 нм) или фиолетовый (400 нм) свет (2 с, 1 мВт / мм 2 ) ускоряет восстановление после инактивации (на 5 с).Обратите внимание на внешний ток, индуцированный синим светом. ч Количественная оценка извлечения как в г . i Пиковые следы образца от одного ооцита, иллюстрирующие фототоки e Np HR3.0, индуцированные только освещением 590 нм (2,6 мВт / мм 2 ) или совместным освещением 473 нм (1 мВт). / мм 2 ) или 400 нм (1 мВт / мм 2 ). j Количественная оценка I поздно / I пик как в i . k Образец следов от одного ооцита, иллюстрирующий фототоки e Np HR3.0, индуцированные только освещением 473 нм (6,6 мВт / мм 2 ), совместным освещением 590 нм (2,6 мВт / мм 2). ) и 400 нм (1 мВт / мм 2 ) или совместным освещением на 532 нм (6,6 мВт / мм 2 ) и 400 нм (1 мВт / мм 2 ). l , m Количественная оценка I пик , I конец и I конец / I пик как в k .Все измерения проводились в растворе Рингера (pH 7,6) при удерживающем потенциале -40 мВ. Данные представлены как среднее ± стандартная ошибка среднего. * P <0,05, ** P <0,01, *** P <0,001. c , h , j , m Звездочки указывают уровни значимости апостериорных тестов t с поправкой Бонферрони после одностороннего дисперсионного анализа ( h ) или однофакторного дисперсионного анализа с повторными измерениями ( c , j , м )

После 60-секундного освещения на длине волны 590 нм, e Np HR3.0 медленно восстанавливался после инактивации с взвешенной постоянной времени 200 ± 45 с в темноте ( F = 231, df = 1,29, P = 5,3 × 10 -8 , n = 8 клеток, одна- ANOVA с повторными измерениями, поправка Гринхауса-Гейссера, рис. 4e – f). Поэтому мы выяснили, можно ли ускорить выздоровление с помощью коротковолнового света. В то время как световые импульсы (2 с, 1 мВт / мм 2 ) при 473 нм или 400 нм ускоряли восстановление после инактивации, фиолетовый свет оказался значительно более эффективным (контроль vs.473 нм: P = 0,047; контроль по сравнению с 400 нм: P = 1,4 × 10 -3 ; 473 нм против 400 нм: P = 0,037; post hoc t тесты с поправкой Бонферрони; F = 23,6, df = 2, P = 1,4 × 10 −3 , n = 3 ячейки, односторонний дисперсионный анализ, рис. 4g, h).

Затем мы исследовали, может ли коротковолновый свет облегчить инактивацию e Np HR3.0 при совместном применении с желтым светом. Мы обнаружили, что комбинация света с длиной волны 590 нм (2.6 мВт / мм 2 ) с фиолетовым (400 нм, 1 мВт / мм 2 ) или синим (473 нм, 1 мВт / мм 2 ) светом значительно увеличивает I поздний / I отношение пика , при этом фиолетовый свет более эффективен (590 нм против 590 + 473 нм: P = 0,021; 590 нм против 590 + 400 нм: P = 1,1 × 10 — 3 ; 590 + 473 нм против 590 + 400 нм: P = 0,012; post hoc t тесты с поправкой Бонферрони; F = 61.3, df = 2, P = 9,9 × 10 −4 , односторонний дисперсионный анализ с повторными измерениями, рис. 4i, j). Фиолетовый свет сам по себе вызвал очень небольшие фототоки, если они вообще были ( I 400 / I 473 = 6,5 ± 1,6%, n = 4 элемента). Основываясь на приведенных выше результатах, мы затем исследовали возможность дальнейшего увеличения амплитуды стабильных фототоков, исследуя комбинацию зеленого и фиолетового света. Здесь мощность света 532 нм была установлена ​​на 6,6 мВт / мм 2 , что привело к аналогичной инактивации по сравнению со светом 590 нм при 2.6 мВт / мм 2 при отдельном применении (рис. 4г). Интересно, что комбинация света 1 мВт / мм 2 400 нм с светом 6,6 мВт / мм 2 532 нм значительно превосходит комбинацию с светом 2,6 мВт / мм 2 590 нм для более высокой амплитуды фототока и устраненная инактивация ( I поздно / I пик для 590 + 400 нм по сравнению с 532 + 400 нм: P = 2.3 × 10 −5 , post hoc t Тест с поправкой Бонферрони; F = 126, df = 2, P = 1.2 × 10 −5 , односторонний дисперсионный анализ с повторными измерениями; Рис. 4к – м). Кроме того, в то время как 6,6-мВт / мм 2 только свет с длиной волны 473 нм также индуцировал стабильные фототоки с незначительной инактивацией в течение 60 с ( I поздно по сравнению с I пик : t (3 ) = 2,75, P = 0,071, n = 4 ячейки, парный тест t ; рис. 4l), его амплитуда фототока составляла лишь около одной трети от зелено-фиолетовой комбинации (рис. 4k – m ).

Инактивация e

Np HR3.0 является pH- и хлорид-зависимым.

Было высказано предположение, что депротонирование основания Шиффа лежит в основе инактивации Np HR [11, 22, 26]. Поэтому мы исследовали влияние внеклеточного pH (pH из ) на инактивацию e Np HR3.0. Ожидается, что при более высоком pH из основание Шиффа будет легче терять протон. Действительно, повышенная инактивация наблюдалась при увеличении pH из ( F = 321, df = 2, P = 8.5 × 10 −10 , n = 6 ячеек, односторонний дисперсионный анализ с повторными измерениями, рис. 5a). Более того, поскольку pK a основания Шиффа сильно зависит от занятости иона хлорида в сайте связывания I Np HR [29], связывание хлорида с Np HR может стабилизировать протонированное основание Шиффа. В соответствии с этим, более низкая концентрация внеклеточного хлорида ([Cl ] из ) вызвала более сильную инактивацию e Np HR3.0 ( F = 201, df = 1.4, P = 9,7 × 10 −7 , n = 6 ячеек, односторонний дисперсионный анализ с повторными измерениями, поправка Гринхауса-Гейссера; Рис. 5б). Чтобы получить представление о механизме извлечения e Np HR3.0 из инактивации (т.е. репротонирования основания Шиффа), мы систематически исследовали эффекты pH из , [Cl ] из , а также мембранный потенциал от постоянной времени восстановления е Np HR3.0 в темноте. Рекавери e Np HR3.0 от инактивации может быть ускорено либо уменьшением pH из [тесты на pH из эффектов: F = 61, df = 2, P = 2,9 × 10 -6 ; взаимодействие (pH из × Δ t ): F = 16,9, df = 2,66, P = 3,3 × 10 −5 ; смешанный модельный дисперсионный анализ, поправка Гринхауса-Гейссера; Рис. 5c] или увеличение [Cl ] из [тесты для [Cl ] из эффектов: F = 176, df = 3, P = 9.9 × 10 −11 ; взаимодействие ([Cl ] out × Δ t ): F = 49,6, df = 4,97, P = 1,5 × 10 −13 ; смешанный модельный дисперсионный анализ, поправка Гринхауса-Гейссера; Рис. 5d]. Это указывает на то, что протон для репротонирования основания Шиффа исходит из внеклеточного пространства. Интересно, что не наблюдалось значительного различия времени восстановления e Np HR3.0 при различных мембранных потенциалах, когда [Cl ] из составляло 121 мМ при pH 7.6 [испытания на эффекты мембранного потенциала: F = 3,63, df = 2, P = 0,077; взаимодействие (мембранный потенциал × Δ t ), F = 2,14, df = 2,85, P = 0,13; смешанный модельный дисперсионный анализ, поправка Гринхауса-Гейссера; Рис. 5д)]. Взятые вместе, данные предполагают, что протон для репротонирования основания Шиффа происходит с внеклеточной стороны, и его захват всегда облегчается связыванием хлорида, и наоборот.

Рис. 5

Механическое понимание инактивации и восстановления e Np HR3.0. a Снижение концентрации внеклеточных протонов усиливает инактивацию e Np HR3.0. Токи измеряли в том же ооците в растворе Рингера при pH 5,6, pH 7,6 или pH 9,6. b Увеличение концентрации внеклеточного хлорида снижает инактивацию e Np HR3.0. Токи измеряли в одном и том же ооците при разных концентрациях хлоридов. Буферы с различными концентрациями хлоридов были получены путем смешивания раствора Рингера (pH 7,6) и раствора NMG-Asp (pH 7.6) при разном соотношении. c Восстановление фототоков e Np HR3.0 в растворе Рингера при pH 5,6 ( n = 4 клетки), pH 7,6 ( n = 8 клеток) или pH 9,6 ( n = 4 ячейки) при удерживающем потенциале — 40 мВ. d Восстановление фототоков e Np HR3.0 при концентрации внеклеточного хлорида 6 мМ ( n = 5 клеток), 16 мМ ( n = 6 клеток), 60 мМ ( n = 6 ячеек) или 121 мМ ( n = 5 ячеек).pH был установлен на 7,6, а удерживающий потенциал — на -40 мВ. Пунктирные линии в c и d представляют биэкспоненциальные соответствия данным о населении. e Извлечение e Np HR3.0 (pH 7,6) при удерживающих потенциалах — 100 мВ ( n = 7 ячеек), — 40 мВ ( n = 5 ячеек) или + 20 мВ ( n = 5 ячеек). Пятьсот девяносто нанометрового света с интенсивностью 2,6 мВт / мм 2 применялось в течение 60 с в a и b , а в c e , дополнительные 10-мс 590-нм световые плюсы с такой же интенсивностью подавались через 1, 5, 10, 20, 40, 60, 120 и 300 с после первоначального 60-секундного освещения, как на рис.4e. Данные представлены как среднее ± стандартная ошибка среднего. * P <0,05, *** P <0,001. a , b Звездочки указывают уровни значимости апостериорных тестов t с поправкой Бонферрони после однофакторного дисперсионного анализа с повторными измерениями

Индуцированная синим светом фотостимуляция e

Np HR3.0 позволяет эффективно длительно -временная гиперполяризация и ингибирование

Затем мы исследовали, трансформируются ли превосходные свойства фотостимуляции с использованием коротковолнового света, обнаруженные в экспериментах с фиксацией напряжения, в более высокую эффективность длительного нейронального ингибирования.Мы сосредоточились на синем свете, поскольку использование нескольких длин волн потенциально может представлять собой усложняющий фактор в приложениях in vivo (см. Раздел «Обсуждение»), несмотря на более низкие амплитуды фототока по сравнению с комбинацией зеленого и фиолетового цветов (рис. 4). ). Используя токовые клещи из пирамидных клеток CA1 в острых срезах головного мозга мышей, повторяющиеся 1-секундные инъекции тока через патч-пипетку были использованы для возбуждения возбуждения потенциала действия в присутствии ионотропного глутамата и антагонистов рецепторов ГАМК (рис.6а). Фотостимуляция e Np HR3.0 на длине волны 594 нм (5 мВт) в течение 1 мин с подавлением разряда с потенциалом действия сильно зависящей от времени способом: при срабатывании в ответ на первый тестовый импульс (через 500 мс после появления света стимуляция) практически исчезла, подавляющий эффект практически исчез как на втором, так и на всех последующих тестовых импульсах (рис. 6а, б). Напротив, фотостимуляция при 488 нм (5 мВт) надежно ингибировала разряд с потенциалом действия в течение всего 1-минутного периода освещения [взаимодействие (контроль / 488 нм / 594 нм × количество тестовых импульсов): F = 13.2, df = 4,6, P = 1,7 × 10 -7 , n = 10 ячеек, двухфакторный дисперсионный анализ с повторными измерениями, поправка Хюйна-Фельдта; Рис. 6а, б]. Кроме того, фотостимуляция желтым светом приводила к выраженной, но преходящей гиперполяризации, тогда как фотостимуляция при 488 нм вызывала высокостабильный гиперполяризационный ответ во всех проанализированных клетках. Соответственно, двухфакторный дисперсионный анализ с повторными измерениями показал очень значимое взаимодействие между независимыми переменными ( F = 71.2, df = 5,0, P = 3,1 × 10 −20 , n = 10 ячеек, поправка Хюйна-Фельдта; Рис. 6а, в).

Рис. 6

Фотостимуляция e Np HR3.0 при 488 нм обеспечивает эффективную долгосрочную гиперполяризацию и ингибирование. a Пример измерений токовых клещей для одиночной ячейки (смещенной примерно до -65 мВ в состоянии покоя), периодически подвергающейся воздействию входящего тока постоянной амплитуды либо без (5 мВт, слева), либо с фотостимуляцией на 594 нм (5 мВт). , посередине) или 488 нм (справа) соответственно.Обратите внимание, что стимуляция желтым светом первоначально отменяла возбуждение потенциала действия (#), которое восстанавливалось в течение длительных периодов фотостимуляции. Также отметим, что стимуляция синим светом подавляла возбуждение в течение всего 1-минутного периода на фоне стабильной гиперполяризации. На вставках: текущие реакции на последний тестовый импульс при более высоком временном увеличении (масштабные полосы, 25 мВ, 0,5 с). b Количество потенциалов действия (AP) в зависимости от количества тестовых импульсов. c Динамика мембранного потенциала (серый цвет — период фотостимуляции).Данные представлены в виде среднего значения ± SEM

Зависимость от длины волны и продолжительности нагрузки хлорида во время фотостимуляции e

Np HR3.0

Поскольку e Np HR3.0 опосредует поглощение хлорида, пролонгированную активацию e Np HR3 .0 может влиять на [Cl ] в и, следовательно, сдвигать реверсивный потенциал зависимых от рецептора токов GABA A ( E GABA ) в положительном направлении [30]. Поэтому мы количественно определили зависимость длины волны и продолжительности индуцированных фотостимуляцией изменений в E GABA , используя записи токовых клещей с перфорированным пластырем грамицидина из пирамидных клеток CA1.В присутствии антагонистов ионотропных глутаматных рецепторов (10 мкМ DNQX, 50 мкМ APV) и потенциал-зависимых каналов Na + (0,5 мкМ TTX) и Ca 2+ (100 мкМ CdCl 2 ) клетки заражали. с насыщающей затяжкой агониста рецептора GABA A изогувацина (100 мкМ, 2 с). Как было показано ранее, пик мембранного потенциала ( В, , , пик ) в этих условиях приближается к E GABA [31]. Мы обнаружили, что 30-секундная фотостимуляция на 488 нм (5 мВт) немного, но значительно сместила пик V на +1.9 ± 0,6 мВ ( t (6) = — 3,15, P = 0,020, n = 7 ячеек, парный тест t ; рис. 7а, б). Этот эффект был дозозависимым, поскольку более выраженный сдвиг пика V на + 7,2 ± 0,7 мВ ( t (12) = — 9,77, P = 4,6 × 10 −7 , n = 13 клеток, парные t Тест ; фиг. 7c, d) наблюдали в течение периода фотостимуляции 120 с (488 нм, 5 мВт). Напротив, фотостимуляция желтым светом в течение 120 с (594 нм, 5 мВт) не оказала значительного влияния на пик В (+0.0 ± 0,7 мВ ( t (9) = 0,027, P = 0,98, n = 10 ячеек, парный тест t ; рис. 7д, е)). Важно отметить, что мембранный потенциал покоя ( В, , , покой, ) не был затронут ни одной парадигмой фотостимуляции ( P > 0,1, парные тесты t ; рис. 7a – f), что свидетельствует против сильного фототоксического эффекта. Таким образом, наши данные демонстрируют, что фотостимуляция e Np HR3.0 синим светом не только увеличивает установившиеся токи (рис.3) и изменения мембранного потенциала (Рис. 6), но также усиливает опосредованное e Np HR3.0 увеличение [Cl ] в .

Рис. 7

Зависимость концентрации хлоридов от длины волны и продолжительности в результате фотостимуляции e Np HR3.0. a Образец грамицидин перфорированный пластырь для регистрации мембранного потенциала в ответ на нанесение изогувацина (ISO, 100 мкМ, 2 с) до (контроль) и после фотостимуляции при 488 нм в течение 30 с (5 мВт).Пунктирными линиями обозначен мембранный потенциал покоя ( В, , , покой, ) и пик ( В, , , пик, ), измеренный до фотостимуляции. Обратите внимание, что V пик приблизительно соответствует E GABA в наших условиях записи. b Количественная оценка В покоя и В пик до и после фотостимуляции. c , d Как в a и b , но фотостимуляция выполнялась в течение 120 с при 488 нм (5 мВт). e , f Как в a и b , но фотостимуляция выполнялась в течение 120 с при 594 нм (5 мВт). Эксперименты проводились при P4–10. Данные представлены как среднее ± стандартная ошибка среднего. n.s. не значимо, ** P <0,01, *** P <0,001

Следовательно, изменения в динамике сети в результате изменений E GABA представляют собой потенциальное экспериментальное ограничение, связанное с использованием e Np HR3.0. Мы исследовали эту возможность на срезах гиппокампа, полученных от новорожденных мышей (P3-6), т.е.е., на стадии развития, когда деполяризация ГАМКергической передачи запускает синхронизированную сетевую активность [28, 32]. В соответствии с опубликованными данными [33], фармакологическое ингибирование ко-переносчика хлоридов NKCC1 с использованием буметанида (10 мкМ) в значительной степени устраняет всплески спонтанных постсинаптических токов (PSC), подтверждая, что синхронизированная сетевая активность сильно [Cl ] в — иждивенец в этом возрасте (дополнительный файл 2: рис. S2 A, B ). Мы предсказали, что в постоянном присутствии буметанида фотостимуляция пирамидных клеток Emx1 + CA1 будет спасать всплески PSC путем повышения [Cl ] в .Действительно, после смещения освещения синим светом (60 с, 5 мВт) всплески PSC временно снова появлялись (количество всплесков PSC на интервал 20 с: до стимула 0,35 ± 0,19, после стимула 4,25 ± 0,66, t (3) = — 6,57, n = 4 ячейки, P = 7,2 × 10 −3 , парный t Тест ; Дополнительный файл 2: Рисунок S2 A – C ). Таким образом, эти данные обеспечивают принципиальное доказательство того, что активация e Np HR3.0 может изменять динамику популяции нейронов из-за сдвига E GABA .Мы также пришли к выводу, что такие эффекты могут быть менее выражены в срезах, полученных на более поздней стадии развития (P11-12), когда KCC2-зависимая экструзия хлоридов более эффективна [34], синхронизированные сетевые события практически отсутствуют и спонтанные возбуждающие PSCs (EPSC) в основном отражают миниатюрный релиз. В соответствии с этим прогнозом, длительная (5 минут) фотостимуляция на 488 нм (5 мВт) не смогла изменить частоту EPSC после смещения стимуляции, и частота EPSC была стабильной в течение следующих 10 минут ( F = 0.99, df = 2, P = 0,41, n = 6 ячеек, односторонний дисперсионный анализ с повторными измерениями; Дополнительный файл 2: Рисунок S2 D – F ). Последнее наблюдение также свидетельствует против сильного фототоксического эффекта на синаптическое высвобождение из-за продолжительной фотостимуляции синим светом.

Камера

устанавливает рекорд выдержки с восьмилетней выдержкой

«Дни на солнце» Регины Валкенборг (Фото: Регина Валкенборг / Университет Хартфордшира)

Летние Олимпийские игры 2012 года в Лондоне завершились в августе 2012 года.Спустя всего неделю после того, как спортсмены разошлись, студентка магистратуры изобразительного искусства начала проект в Университете Хартфордшира в Великобритании. Регина Валкенборг создала камеру-обскуру из алюминиевой пивной банки, клейкой ленты и светочувствительной фотобумаги. Камера была прикреплена лицом к небу на стене университетской обсерватории Бейфордбери и была забыта — она ​​выдерживала погодные условия в течение восьми лет и одного месяца. Дэвид Кэмпбелл — главный технический директор обсерватории — этой осенью наконец-то решил снять камеру.Внутри он обнаружил изображение с самой длинной выдержкой, когда-либо сделанное, на котором показаны солнечные пути по небу за восемь лет.

Будучи студентом изящных искусств, Валкенборг интересовался использованием старых технологий для захвата изображений. Она экспериментировала с камерами-обскурами, используя технику, известную как камера-обскура. Ее фотоаппарат из пивной банки — яркий пример этой техники. Небольшое отверстие в светонепроницаемой коробке (или банке) пропускает свет внешнего мира. Изображение внешнего мира переворачивается и проецируется в затемненное пространство.Ранние фотографы научились фиксировать это оптическое явление, помещая светочувствительную пленку за маленьким отверстием, как это сделал Валкенборг. В то время как многие камеры-обскуры требуют выдержки в несколько секунд или более, восьмилетняя выдержка камеры для пивных банок под названием « дней на солнце » является самой продолжительной из когда-либо зарегистрированных.

В течение восьми лет, пока камера оставалась прикрепленной к обсерватории, на фотобумаге внутри была сделана так называемая солнечная диаграмма, показывающая движение солнца по дугам по небу.Самая высокая дуга — это летнее солнцестояние; самый низкий — Зимнее солнцестояние. В некоторые дни, вероятно, из-за пасмурной погоды газета оставила мало впечатлений. Проходящих мимо людей или деревьев не видно, только яркий свет солнца. Согласно заявлению университета, возможно, что в газете было зафиксировано 2953 полных следа солнца.

Камера

Валкенборга никогда не предназначалась для восьмилетней выдержки. К счастью, передвижная обсерватория, на которой он был установлен, каждый день возвращалась в прежнее положение.Согласно твиту из обсерватории, камера записала вид с того места, где она находилась, в течение периода времени, эквивалентного 4% от всей истории фотографии. Поступив так, камера вошла в историю своим маловероятным (и незапланированным) выживанием. В то время как изображение Солнца Валкенборга считается самой длинной известной экспозицией изображения, другие фотографы, экспериментирующие с камерами-обскурами, надеются установить новые рекорды. В 2015 году Джонатон Китс разместил свои камеры Millennium с выдержкой на 1000 лет, чтобы наблюдать за озером Тахо в течение того, что кажется невозможной вечностью.Для многих увлечение и проблема, связанная с камерами-обскурами и фотографией с длинной выдержкой, заключается в том, чтобы запечатлеть постоянно меняющийся мир в движении.

Магистрантка

Регина Валкенборг в 2012 году создала камеру-обскуру из алюминиевой пивной банки, клейкой ленты и светочувствительной фотобумаги. Она смотрела на него ввысь, со стороны обсерватории Бейфордбери Университета Хартфордшира, где о нем забыли до этого года.

Камера для пивных банок была прикреплена к одному из куполов телескопа студенткой изящных искусств Региной Валкенборг в августе 2012 года — через неделю после закрытия Олимпийских игр 2012 года в Лондоне, до окончательного открытия в сентябре 2020 года.pic.twitter.com/R4Rdz7XSDO

— Обсерватория Хартфордширского университета (@BayfordburyObs) 10 декабря 2020 г.

«Дни на Солнце» — это, пожалуй, самая длинная экспозиция в истории наблюдений, на которой зафиксировано до 2953 дуги солнечного пути по небу.

Это сегодняшний вид с того места, где была установлена ​​камера. Слева — самый старый телескоп обсерватории, построенный в 1969 году, а справа — портал для исследования атмосферы, построенный на полпути к экспозиции.pic.twitter.com/WLRTASz4kC

— Обсерватория Хартфордширского университета (@BayfordburyObs) 10 декабря 2020 г.

ч / т: [Vice, PetaPixel]

Статьи по теме:

Как развитие камеры изменило наш мир

Фотоловушка для дикой природы неожиданно делает забавную фотографию таинственного человека в позе

Парень изобретает камеру для дрона Instax, которая делает мгновенные аэрофотоснимки

Фотографии с длинной выдержкой превращают маршруты для скалолазания в эпические радужные всплески над ландшафтом

Home — Полная цифровая фотография

Из блога

Мой старый веб-сайт Printerville бездействовал уже несколько лет, но вчера я перезагрузил его и разместил свой первый новый пост за десятилетие.Я постарался сохранить внешний вид нового сайта в чистоте, и он должен быть немного более динамичным, чем раньше. Я также удалил оттуда кучу старого контента, за исключением нескольких сообщений, которые все еще появляются в поиске Google.

Бен и я запустили сайты Printerville и Complete Digital Photography примерно в одно время, делясь соответствующими ссылками. С моим постоянным интересом к печати и некоторым интересом, который я наблюдал со стороны коллег-фотографов, казалось, имеет больше смысла вернуть ее, чтобы этот сайт действительно мог больше посвящен фотографии в более широком смысле (и более связан с ней). к книгам Бена).

В ближайшие недели я перенесу последние публикации, посвященные печати, с этого сайта в Printerville, и там же будут размещаться новые сообщения по этой теме (включая два обзора, над которыми я работаю). Я буду размещать здесь ссылки на новые материалы по мере их добавления.

Рик

Небольшое примечание, чтобы сообщить, что мой обзор Epson SureColor P900 (с некоторыми мыслями о его собрате, P700) теперь размещен на сайте.Я знаю, что обещал это какое-то время, но я столкнулся с несколькими проблемами, которые нужно было проверить, прежде чем закончить работу.

Это немного длинновато, но если вы хотите распечатать свои фотографии, особенно на уровне настольных компьютеров, я думаю, что это стоит прочитать.

Некоторое время в середине 2000-х у меня был сайт Printerville, но десять лет назад я перестал публиковать на нем новые работы. Более высокий сегмент рынка настольных фотопринтеров повзрослел, и компании перестали регулярно выпускать новые модели.Например, в начале 2020 года текущий набор принтеров от Canon и Epson — HP давно покинул эту часть рынка — просуществовал пять лет. Только в последний год в этом пространстве была какая-то активность, и я немного написал об этом здесь, на сайте:

С этими объявлениями я получил много вопросов от людей, которые интересовались идеей печати и задавались вопросом, как вообще начать думать о покупке принтера. Я разослал им электронное письмо с некоторыми основными мыслями о том, о чем следует подумать при выборе принтера — или о том, следует ли вам просто воспользоваться услугами онлайн-печати.Учитывая постоянный интерес к этой теме, казалось, что ее стоит опубликовать здесь. Читать дальше »

С тех пор, как в апреле я написал о новой линейке фотоструйных принтеров Epson, я получил много писем, в основном от читателей, интересующихся SureColor P900, 17-дюймовой версией (и ее 13-дюймовым братом, P700). Я рад сообщить, что первые поставки P900, похоже, идут в Штаты. Обе модели должны были быть доступны к началу лета, но похоже, что пандемия нанесла ущерб каналам производства и доставки.

С учетом всего сказанного, я не уверен, насколько заполнен канал на данный момент. У меня сегодня прилетает Р900, но он был заказан пять месяцев назад. Я также знаю еще нескольких человек, которые получали принтеры P700 за последние 60 дней, но Adorama и B&H заказали оба принтера обратно. Мой совет всем, кто ищет эти устройства, — заказать один из предпочитаемых вами источников, чтобы встать в очередь. Я считаю, что большая часть причин, по которым они получают обратный заказ, заключается в том, что большинство прибывающих единиц сразу же отправляется людям, которые предварительно заказали их.

Подробнее »

Еще из блога

Индийский свадебный фотограф из Нью-Йорка — FengLong Photography

Свадебный фотограф из Нью-Йорка — FengLong Photography

Вт

Добро пожаловать

Приступим — не могу дождаться встречи с вами!

R

Последние работы

Последние сообщения о свадьбе и помолвке

Суприна и Шивам | Индийская свадьба в Атланте в конференц-центре Кларенса Брауна | Свадебная фотография за кадром Vlog S3 E16

14 апреля 2020 г.

/

За кадром влог

ЧИТАТЬ ДАЛЕЕ

Радха и Нилкантх | Помолвка на рассвете в BAPS Шри Сваминараян Мандир Атланта

4 марта 2020 г.

/

Обручение

ЧИТАТЬ ДАЛЕЕ

Анджали и Джон | Взаимодействие Индии и Китая в Нью-Йорке | Свадебная фотография за кадром Vlog S3 E14

7 января 2020 г.

/

Обручение

ЧИТАТЬ ДАЛЕЕ

Свадебная фотография 2019 Итоги года

2 января 2020 г.

/

За кадром влог

ЧИТАТЬ ДАЛЕЕ

Шехзади и Адиль | Индийская помолвка в театре Fox | Свадебная фотография за кадром Vlog S3 E13

27 декабря 2019 г.,

/

За кадром влог

ЧИТАТЬ ДАЛЕЕ

Лайла и Юсуф | Турецкая индийская свадьба в стиле фьюжн исмаилитов в Атланте | Свадебная фотография за кадром Vlog S3 E12

23 декабря 2019 г.,

/

За кадром влог

ЧИТАТЬ ДАЛЕЕ

Сана и Хуррам | Мусульманская индийская свадьба в Гринвилле Марриотт | Свадебная фотография за кадром Vlog S3 E11

3 декабря 2019 г.,

/

За кадром влог

ЧИТАТЬ ДАЛЕЕ

Лайла и Юсуф | Заседание по сотрудничеству с Индией в ущелье Таллула | Свадебная фотография за кадром Vlog S3 E10

15 октября 2019 г.,

/

За кадром влог

ЧИТАТЬ ДАЛЕЕ

A & S | Заседание по сотрудничеству вьетнамско-пакистанско-индийского фьюжн в Нью-Йорке | Центральный парк, Гранд Сентрал, Вершина Скалы и Брукилн!

4 октября 2019 г.,

/

Обручение

ЧИТАТЬ ДАЛЕЕ

Сколько длится типичная помолвочная фотосессия?

Как определить продолжительность помолвки

Прежде чем вы решите, как долго должна длиться ваша помолвочная съемка, вам следует знать несколько вещей заранее.Вот несколько вопросов, которые вы можете задать себе, чтобы иметь представление об этом процессе планирования.

Как работает помолвка?

В последнее время помолвочные фотосессии стали неотъемлемой частью предсвадебных мероприятий. Многие пары теперь включают планы помолвки вместе со своими свадебными планами. Стало нормой, что свадьба не обходится без этого волнующего события. Многие фотографы даже добавляют помолвку в пакет услуг.

На типичной фотосессии с помолвкой мы попросим вас выразить определенные позы, чтобы они могли сделать снимок.Скорее всего, вам придется выполнять одну и ту же позу несколько раз, чтобы они могли делать снимки под разными углами.

Как будет проходить помолвочная съемка, полностью зависит от вас, но главное — довериться способностям вашего фотографа. Они там, чтобы следовать за вами и запечатлеть ваше видение.

Чего вы хотите добиться на помолвке?

Для успешной и приятной съемки помолвки обе стороны должны быть на одной странице. Как только вы задумали эту идею, вы должны сообщить об этом нанятому фотографу, чтобы он тоже мог подготовиться.Было бы полезно также услышать, что они говорят о ваших планах, чтобы увидеть, есть ли у них какие-либо ценные идеи или идеи, которые можно добавить.

Обязательно планируйте заранее, чтобы достичь всего, чего хотите вы и ваш партнер. Например, если вам нужны фотографии для помолвки на тему океана, лучше всего снимать на любимом пляже.

Обычно наши фотографы сообщают вам, сколько снимков они могут сделать, и предлагают варианты сделок. Кроме того, вы обсудите, на какой срок вы хотите их нанять или как долго они доступны.

Как долго длится помолвочная фотосессия?

Очевидно, продолжительность вашего сеанса взаимодействия будет зависеть от того, как долго вы хотите, чтобы он продолжался. Большинство фотосессий длится около часа. Это идеальная продолжительность, которую предлагают многие профессиональные фотографы. Этой часовой фотосессии для помолвки обычно достаточно, чтобы сделать все фотографии, которые нужны парам.

Однако, если вы запланировали, например, переодеться в несколько разных нарядов или поехать в несколько разных мест во время съемки, вам может потребоваться больше времени на сеанс, чтобы выполнить все, что вы хотите в течение дня.Имейте в виду, что у вашего фотографа есть временные рамки для работы, поэтому планируйте заранее.

Время дня для помолвочной съемки — это также ваш выбор. Настоятельно рекомендуется делать снимки до захода солнца, обычно за 30 минут до захода солнца. Это время дня, которое они называют золотым часом, дает им идеальный солнечный свет или освещение, которое делает фотографии изысканными. Так что стоит хотя бы несколько снимков сделать за это время.

Как добиться наилучших результатов при помолвке на фото?

Tara Long Photography

Tara Long Photography (для беременных, новорожденных, детей, семья, фотография) обслуживает район Центрального Иллинойса.Tara Long Photography (для беременных, новорожденных, детей, семья, фотография) обслуживает район Спрингфилд, штат Иллинойс. Tara Long Photography (для беременных, новорожденных, детей, семья, фотография) обслуживает не только Спрингфилд, штат Иллинойс, но и окружающие сообщества. Tara Long Photography из Спрингфилда, штат Иллинойс, предоставляет фотографии для беременных. Tara Long Photography из Спрингфилда, штат Иллинойс, занимается фотографией новорожденных и специализируется на фотографии новорожденных. Tara Long Photography из Спрингфилда, штат Иллинойс, предоставляет детские фотографии.Tara Long Photography из Спрингфилда, штат Иллинойс, предоставляет семейные фотографии. Tara Long Photography из Спрингфилда, штат Иллинойс, предоставляет услуги по фотосъемке помолвок и пар. Компания Tara Long Photography из Спрингфилда, штат Иллинойс, также проводит фотосессии для взрослых. Тара Лонг Фотография (для беременных, новорожденных, детей, семейная фотография) — семейный фотограф с естественным освещением из Спрингфилда, штат Иллинойс. Сеансы для беременных, новорожденных, детей, семьи, помолвки, пары и пожилые доступны с пакетами сеансов.Tara Long Photography (фотосъемка для беременных, новорожденных, детей, семьи, пожилых людей) рада быть частью сообщества Спрингфилда, штат Иллинойс, и предлагает сеансы для беременных, новорожденных, детей, семьи, пары, помолвки и занятия для пожилых людей в районе Спрингфилда, штат Иллинойс. Сеансы по беременности и родам Тары Лонг в Спрингфилде, штат Иллинойс, можно проводить круглый год. Сеансы новорожденных Tara Long Photography из Спрингфилда, штат Иллинойс, можно проводить круглый год, но в идеале для специализированных фотосессий новорожденных в возрасте от 5 до 10 дней.Детские сессии Tara Long Photography из Спрингфилда, штат Иллинойс, можно проводить круглый год, включая студийные. Семейные сессии Tara Long Photography из Спрингфилда, штат Иллинойс, могут проводиться круглый год и могут включать студийные занятия, в зависимости от количества членов семьи. Tara Long Photography из Спрингфилда, штат Иллинойс, также предоставляет скидки на сеансы для беременных, новорожденных, детей, семьи, пары и пожилых людей семьям, в которых ближайший член семьи служит в армии.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован.